sirna干擾原理步驟 在RNAi實驗中,GFP干擾組的作用是什么?
用綠色熒光蛋白(GFP)來反映RNA干擾(RNAi)載體的轉(zhuǎn)染效率,從而研究RNAi載體的抑制作用。它最早是在植物研究中發(fā)現(xiàn)的,后來在線蟲研究中更為深入。其研究成果于2006年獲得諾貝爾獎(安德魯·法
用綠色熒光蛋白(GFP)來反映RNA干擾(RNAi)載體的轉(zhuǎn)染效率,從而研究RNAi載體的抑制作用。它最早是在植物研究中發(fā)現(xiàn)的,后來在線蟲研究中更為深入。其研究成果于2006年獲得諾貝爾獎(安德魯·法爾和克雷格·梅洛)。簡單的過程是,雙鏈RNA分子被一類稱為Dicer的酶切割成小RNA分子(~35nt),然后與幾種蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物。激活后,它們能特異性地結(jié)合到靶mRNA上進行降解。表觀遺傳學(xué)又稱表觀遺傳學(xué),是近年來研究的熱點。與經(jīng)典的遺傳學(xué)研究不同,基因功能的研究是在不改變核苷酸序列的情況下進行的。簡言之,研究從DNA到蛋白質(zhì)過程中可逆的和遺傳的變化。最典型的是DNA修飾和組蛋白修飾,因為這些不同的修飾會導(dǎo)致基因沉默或表達改變。RNAi可以看作是表觀遺傳學(xué)的一部分。RNAi是mRNA水平的調(diào)節(jié),沒有DNA序列的改變,有很多內(nèi)源性RNAi,很多還在研究中。如你所知,我希望能有所幫助。參考文獻來自維基百科。
在RNAi實驗中,GFP干擾組的作用是什么?
RNAi是指由與靶基因同源的雙鏈RNA誘導(dǎo)的特異性轉(zhuǎn)錄后基因沉默。
作用機制是dsRNA被特定核酸酶降解,產(chǎn)生小干擾RNA(siRNA)。這些siRNAs與同源靶RNA互補結(jié)合,通過特異酶降解靶RNA,抑制和下調(diào)基因表達。
當(dāng)外源基因如RNA干擾編輯病毒基因、人工轉(zhuǎn)移基因和轉(zhuǎn)座子隨機整合到宿主細(xì)胞基因組中并由宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄時,通常會產(chǎn)生一些dsRNA。
什么是rnai干擾?其作用機制是什么?
可能是RNA與基因組DNA混合。這樣,在進行PCR時,如果基因完全不表達,結(jié)果是DNA混合在一起,PCR就可以給出結(jié)果。但這條帶不是來自RNA。這是DNA污染,干擾PCR結(jié)果。RNA可以被提取出來,然后用DNA酶處理,分解可能混入其中的DNA。合理設(shè)計底漆也可以避免。即使存在DNA混合,用這種方法設(shè)計的引物也只能擴增RNA,而不能擴增DNA。這就要求引物應(yīng)該設(shè)計成能夠穿過外顯子連接。因為DNA中基因的外顯子和內(nèi)含子是分開的,而RNA中的內(nèi)含子是被切斷的,外顯子是連在一起的。剩下的,如果你想去的話,是接近結(jié)果的
正義引物可以作為上游引物,反義引物可以作為下游引物,這是RNA干擾中常用的。這兩個引物大部分是互補的。