如何進(jìn)行引物設(shè)計(jì)？如果這對通用引物沒有信號，就意味著這兩個(gè)位置有SNP，導(dǎo)致沒有擴(kuò)增?？梢詤⒖紟追N方法。1：你可能知道這種細(xì)菌的種類和屬，所以去NCBI找到相關(guān)種類的16S序列，做序列比對，設(shè)計(jì)簡并引

如何進(jìn)行引物設(shè)計(jì)？

如果這對通用引物沒有信號，就意味著這兩個(gè)位置有SNP，導(dǎo)致沒有擴(kuò)增?？梢詤⒖紟追N方法。

1：你可能知道這種細(xì)菌的種類和屬，所以去NCBI找到相關(guān)種類的16S序列，做序列比對，設(shè)計(jì)簡并引物，擴(kuò)增全長，然后測序。

2：你根本不了解物種。你可以在網(wǎng)上找到更多的入門知識。最好放大v3v4區(qū)或V4區(qū)。在放大了其中一些之后，你可以對它們進(jìn)行排序和比較。一般來說，你可以確認(rèn)屬，然后按照1的方法。

3:如果部分序列可以通過方法2擴(kuò)增，但全長引物未能擴(kuò)增，則將獲得的部分序列用作race。

4:以上所有操作均失敗。第二代的DNA被提取和測序，基因組被直接測量（如果你認(rèn)為成本太高，你可以減少數(shù)據(jù)量進(jìn)行比較）。

win the race是什么意思？

當(dāng)我們只知道一個(gè)基因mRNA的中間序列，而不知道全長序列時(shí)，所有的PCR擴(kuò)增方法都包括3“末端競爭和5”末端競爭。3′端序列是通過已知的中間片段序列設(shè)計(jì)上游引物，通過3′聚（a）尾序列引入下游引物序列，然后進(jìn)行PCR得到從已知序列到3′端的全長序列；5′端序列是通過已知的中段序列設(shè)計(jì)下游引物，通過5′端引入上游引物序列，然后進(jìn)行PCR，得到從已知序列到5′端全長序列的全長序列。獲得了該基因的全長序列。