為什么要有測(cè)序引物 測(cè)序平臺(tái)的引物和接頭設(shè)計(jì)原則是什么?
測(cè)序平臺(tái)的引物和接頭設(shè)計(jì)原則是什么?首先,我們需要了解排序的原理。大多數(shù)時(shí)候,我們要測(cè)試的序列很長(zhǎng)。目前的測(cè)序方法不可能測(cè)試整個(gè)序列的長(zhǎng)度。因此,要打破長(zhǎng)序列,將有許多短序列。我們需要設(shè)計(jì)一個(gè)連接器來(lái)
測(cè)序平臺(tái)的引物和接頭設(shè)計(jì)原則是什么?
首先,我們需要了解排序的原理。大多數(shù)時(shí)候,我們要測(cè)試的序列很長(zhǎng)。目前的測(cè)序方法不可能測(cè)試整個(gè)序列的長(zhǎng)度。因此,要打破長(zhǎng)序列,將有許多短序列。我們需要設(shè)計(jì)一個(gè)連接器來(lái)拉出你想要的序列并在計(jì)算機(jī)上測(cè)試它。此連接器可能是隨機(jī)的,這取決于您執(zhí)行的排序。
求測(cè)序引物的完整定義?
測(cè)序引物分為獨(dú)立引物和通用引物。自備引物是由客戶設(shè)計(jì)的PCR擴(kuò)增引物或在載體和靶片段上設(shè)計(jì)的用于測(cè)序的引物。購(gòu)買載體時(shí)一般由公司提供通用引物,測(cè)序公司免費(fèi)使用T7、SP6、M13等通用測(cè)序引物
如果這對(duì)通用引物沒有信號(hào),說明你在這兩個(gè)位置有SNP,導(dǎo)致沒有擴(kuò)增??梢詤⒖紟追N方法。
1:你可能知道這種細(xì)菌的種類和屬,所以去NCBI找到相關(guān)種類的16S序列,做序列比對(duì),設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,擴(kuò)增全長(zhǎng),然后測(cè)序。
2:你根本不了解物種。你可以在網(wǎng)上找到更多的入門知識(shí)。最好放大v3v4區(qū)或V4區(qū)。在放大了其中一些之后,你可以對(duì)它們進(jìn)行排序和比較。一般來(lái)說,你可以確認(rèn)屬,然后按照1的方法。
3:如果部分序列可以通過方法2擴(kuò)增,但全長(zhǎng)引物未能擴(kuò)增,則將獲得的部分序列用作race。
4:以上所有操作均失敗。第二代的DNA被提取和測(cè)序,基因組被直接測(cè)量(如果你認(rèn)為成本太高,你可以減少數(shù)據(jù)量進(jìn)行比較)。